Uma segunda temporada, chamada Rosario + Vampire Capu2, também foi lançada. Embora usando os mesmos personagens, o anime segue uma linha completamente diferente. O mangá trata principalmente do amadurecimento dos personagens e de questões como xenofobia, preconceito e intolerância (assim como a possibilidade de superação destes). A primeira temporada do anime foca na paixão das “monstrinhas” por Tsukune e acentua os aspectos ecchi. Na segunda temporada o lado ecchi se torna predominante e o enredo se afasta quase por completo do mangá.